酶活分析是一種常用的生物化學(xué)技術(shù)，用于測(cè)定酶的活性。酶是一種生物催化劑，能夠加速化學(xué)反應(yīng)的速率，而酶活分析則是通過(guò)測(cè)定酶催化反應(yīng)的速度來(lái)評(píng)估酶的活性。這種分析方法對(duì)于了解生物體內(nèi)的代謝過(guò)程、疾病機(jī)制以及生物工程等領(lǐng)域具有重要意義。
健康評(píng)估
酶活分析可用于評(píng)估動(dòng)植物的健康狀態(tài)，通過(guò)檢測(cè)特定酶的活性水平，可以及早發(fā)現(xiàn)潛在的健康問(wèn)題，如肝臟疾病、心血管疾病等。
疾病診斷
某些疾病狀態(tài)會(huì)影響體內(nèi)特定酶的活性水平，因此酶活分析可作為輔助診斷工具，幫助醫(yī)生確定疾病類型和進(jìn)展程度。
營(yíng)養(yǎng)評(píng)估
酶活分析可以反映動(dòng)植物的營(yíng)養(yǎng)狀況，一些酶的活性水平受到營(yíng)養(yǎng)攝入的影響，可以幫助評(píng)估動(dòng)植物的營(yíng)養(yǎng)攝取情況。
生長(zhǎng)發(fā)育
酶活分析可用于評(píng)估動(dòng)植物的生長(zhǎng)發(fā)育情況，特定酶的活性水平與生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)，可以幫助監(jiān)測(cè)動(dòng)植物的生長(zhǎng)狀態(tài)。
環(huán)境適應(yīng)
動(dòng)植物在面對(duì)外部環(huán)境變化時(shí)，體內(nèi)酶的活性水平也會(huì)發(fā)生變化，酶活分析可以幫助評(píng)估動(dòng)植物的環(huán)境適應(yīng)能力。
檢測(cè)指標(biāo)
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指標(biāo)
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方法
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標(biāo)準(zhǔn)
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樣品
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用量/g
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氧化還原酶（E1）
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乙醇脫氫酶（ADH）EC1.1.1.1
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紫外分光光度法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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鮮樣，-20℃及以下保存
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0.5
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谷氨酸脫氫酶（GDH）-還原型NADH-GDH
EC1.4.1.2
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紫外分光光度法
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邱旭華. 水稻氮代謝基礎(chǔ)研究：谷氨酸脫氫酶作用的分子機(jī)理
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0.5
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谷氨酸脫氫酶（GDH）-還原型NADPH-GDH
EC1.4.1.2
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紫外分光光度法
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邱旭華. 水稻氮代謝基礎(chǔ)研究：谷氨酸脫氫酶作用的分子機(jī)理
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0.5
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谷氨酸脫氫酶（GDH）-氧化型NAD+-GDH
EC1.4.1.2
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紫外分光光度法
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邱旭華. 水稻氮代謝基礎(chǔ)研究：谷氨酸脫氫酶作用的分子機(jī)理
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0.5
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谷氨酸脫氫酶（GDH）-還原型NADP+-GDH
EC1.4.1.2
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紫外分光光度法
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邱旭華. 水稻氮代謝基礎(chǔ)研究：谷氨酸脫氫酶作用的分子機(jī)理
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0.5
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谷胱甘肽過(guò)氧化物酶GPX
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紫外分光光度法
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董衛(wèi)華. Na2SeO3對(duì)麥苗谷胱甘肽過(guò)氧化物酶影響的研究[D].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2002.
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0.5
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谷胱甘肽還原酶（GR）EC1.6.4.2
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紫外分光光度法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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硝酸還原酶（NR）EC1.6.6.1
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鹽酸萘乙二胺比色法
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王學(xué)奎《植物生理生化試驗(yàn)原理和技術(shù)》
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0.5
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多酚氧化酶（PPO）EC1.10.3.1
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鄰苯二酚比色法
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廖小軍,徐增慧,智先.熱處理對(duì)蘋(píng)果果膠甲酯酶和多酚氧化酶活性影響
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0.5
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抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX/AsA-POD）EC 1.11.1.1
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分光光度法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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過(guò)氧化氫酶（CAT）EC1.11.1.6
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紫外吸收法
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王群,劉朝巍,徐文娟.紫外分光光度法測(cè)定玉米過(guò)氧化氫酶活性新進(jìn)展
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0.5
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過(guò)氧化物酶（POD）EC 1.11.1.7
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愈創(chuàng)木酚比色法
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王學(xué)奎《植物生理生化試驗(yàn)原理和技術(shù)》
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0.5
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脂氧合酶（LOX）EC1.13.11.12
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紫外分光光度法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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ACC氧化酶（ACO）EC 1.14.17.4
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氣相色譜法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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10
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超氧化物歧化酶（SOD）EC 1.15.1.1
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氮藍(lán)四唑光化還原法
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王學(xué)奎《植物生理生化試驗(yàn)原理和技術(shù)》
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0.5
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轉(zhuǎn)移酶（E2）
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蔗糖合成酶（SS）EC 2.4.1.13
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間苯二酚比色法
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王鴻飛《果品蔬菜貯藏與加工實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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蔗糖磷酸合成酶（SPS）EC2.4.1.14
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間苯二酚比色法
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王鴻飛《果品蔬菜貯藏與加工實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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水解酶（E3）
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果膠甲酯酶/果膠酶/果膠酯酶/果膠氧化酶（PE）EC3.1.1.11
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NaOH滴定法
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王鴻飛《果品蔬菜貯藏與加工實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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10
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總淀粉酶（AL）
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DNS比色法
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王學(xué)奎《植物生理生化試驗(yàn)原理和技術(shù)》
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0.5
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α淀粉酶（α-AL）EC3.2.1.1
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DNS比色法
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王學(xué)奎《植物生理生化試驗(yàn)原理和技術(shù)》
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0.5
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β淀粉酶（β-AL）EC3.2.1.2
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DNS比色法
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王學(xué)奎《植物生理生化試驗(yàn)原理和技術(shù)》
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0.5
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纖維素酶（CL）EC3.2.1.4
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DNS比色法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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總幾丁質(zhì)酶（ADH）EC3.2.1.14
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分光光度法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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外切幾丁質(zhì)酶
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分光光度法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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內(nèi)切幾丁質(zhì)酶
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分光光度法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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多聚半乳糖醛酸酶（PG）EC 3.2.1.15
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DNS比色法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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β-葡萄糖苷酶（β-GC）EC3.2.1.21
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DNS比色法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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β-半乳糖苷酶（β-GAL）EC 3.2.1.23
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紫外分光光度法
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董黎梨,汪永保,李映志等.菠蘿蜜果實(shí)糖苷酶和多聚半乳糖醛酸酶的活性變化
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0.5
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中性轉(zhuǎn)化酶（NI）
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DNS比色法
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王永章,王小芳,張大鵬.蘋(píng)果果實(shí)轉(zhuǎn)化酶的種類和特性研究
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0.5
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酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）EC 3.2.1.26
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DNS比色法
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王永章,王小芳,張大鵬.蘋(píng)果果實(shí)轉(zhuǎn)化酶的種類和特性研究
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0.5
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α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Af）EC3.2.1.55
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紫外分光光度法
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莊軍平,蘇菁,李雪萍,陳維信.香蕉果實(shí)成熟軟化時(shí)果皮和果肉中α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性的變化
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0.5
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β-1，3-葡聚糖酶（β-1,3-GA）EC3.2.1.73
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DNS比色法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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裂解酶（E4）
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丙酮酸脫羧酶（PDC）EC4.1.1.1
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紫外分光光度法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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0.5
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果膠裂解酶（PL）EC4.2.2.10
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紫外分光光度法
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高秋芳,郭安平,孔華,鄧偉科,賀立卡.果膠裂解酶、木聚糖酶及果膠裂解酶、木聚糖酶基因在畢赤酵母中的表達(dá)
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0.5
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苯丙氨酸解氨酶（PAL）EC4.3.1.5
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紫外分光光度法
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王學(xué)奎《植物生理生化試驗(yàn)原理和技術(shù)》
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0.5
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ACC合成酶（ACS）EC 4.4.1.14
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氣相色譜法
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曹建康《果蔬采后生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》
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10
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連接酶（E6）
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谷氨酰胺合成酶（GS）EC 6.3.1.2
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分光光度法
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陳勝勇,侯靜,李彩鳳,馬鳳鳴,尹春佳,黃兆峰.蛋白和核酸合成抑制劑對(duì)氮素誘導(dǎo)甜菜谷氨酰胺合成酶基因表達(dá)的影響
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0.5
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檢測(cè)方法
紫外分光光度法
紫外分光光度法是一種常用的分析方法，它基于分子吸收特定波長(zhǎng)的光后發(fā)生能級(jí)躍遷的原理。在酶活性分析中，這種方法通常涉及到酶催化底物反應(yīng)，產(chǎn)生具有特定吸收光譜的產(chǎn)物。通過(guò)測(cè)量反應(yīng)前后溶液的光密度變化，可以計(jì)算出產(chǎn)物的濃度，進(jìn)而計(jì)算酶的活性。
分光光度法
分光光度法是一種常用的測(cè)定酶活性的方法，它具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)?；驹硎?，在特定的條件下，酶可以催化底物反應(yīng)，產(chǎn)生一種叫做產(chǎn)物的物質(zhì)。這個(gè)產(chǎn)物通常具有特定的吸收光譜，因此可以通過(guò)測(cè)量反應(yīng)前后溶液的光密度變化來(lái)計(jì)算產(chǎn)物的濃度，進(jìn)而計(jì)算酶的活性。
DNS比色法
全稱為3,5-二硝基水楊酸比色法，是一種常用于測(cè)定還原糖含量的化學(xué)分析方法。該方法的基本原理是在堿性條件下，二硝基水楊酸（DNS）與還原糖發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成3-氨基-5-硝基水楊酸，該產(chǎn)物在煮沸條件下顯棕紅色，且在一定濃度范圍內(nèi)顏色深淺與還原糖含量成比例關(guān)系。因此，通過(guò)比色法可以間接測(cè)定酶解后還原產(chǎn)物的生成量，以表示酶的活力。
樣本采集
血液樣本采集
動(dòng)物：可以從動(dòng)物的靜脈或尾靜脈采集血液樣本。使用無(wú)添加抗凝劑的干凈采血管，避免血液凝固。動(dòng)物應(yīng)處于空腹?fàn)顟B(tài)，以減少飲食引起的酶活性波動(dòng)。采集后立即將樣本置于冰上，盡快分離血漿或血清，并在-20℃至-80℃下儲(chǔ)存。
植物：對(duì)于植物，可以采集植物的葉片或莖部分，進(jìn)行樣本處理后提取植物汁液作為血液樣本。選擇在早晨或傍晚，此時(shí)酶活性較為穩(wěn)定。使用鋒利的剪刀或手術(shù)刀，快速切割以減少組織損傷。立即將樣本放入預(yù)冷的容器中，使用冰袋或干冰保持低溫，隨后在液氮中冷凍并儲(chǔ)存在-80℃冰箱中。
組織樣本采集
動(dòng)物：從動(dòng)物的肝臟、肌肉、腎臟等組織中采集樣本。確保采集過(guò)程無(wú)污染，避免外源物質(zhì)的干擾。在動(dòng)物死亡后立即采集，以避免死后酶活性的變化。將組織樣本迅速置于液氮中冷凍，然后儲(chǔ)存在-80℃冰箱中，以保持酶的活性。
植物：可以從植物的根部、莖部、葉片等組織中采集樣本，保持樣本的新鮮性和完整性。選擇在早晨或傍晚，此時(shí)酶活性較為穩(wěn)定。使用鋒利的剪刀或手術(shù)刀，快速切割以減少組織損傷。立即將樣本放入預(yù)冷的容器中，使用冰袋或干冰保持低溫，隨后在液氮中冷凍并儲(chǔ)存在-80℃冰箱中。
細(xì)胞樣本采集
可以通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)或細(xì)胞分離技術(shù)，從動(dòng)植物的組織或血液中分離出單個(gè)細(xì)胞，用于酶活檢測(cè)。
共同注意事項(xiàng)
·樣本量：確保采集的樣本量足夠進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)，以提高數(shù)據(jù)的可靠性。
·無(wú)菌操作：整個(gè)采集過(guò)程應(yīng)采用無(wú)菌技術(shù)，避免微生物污染，特別是對(duì)于需要在體外進(jìn)行酶活檢測(cè)的樣本。
·快速處理：樣本采集后應(yīng)盡快進(jìn)行處理，避免酶活性的自然衰減，特別是在室溫下暴露時(shí)間應(yīng)盡可能短。
·詳細(xì)記錄：記錄樣本采集的時(shí)間、地點(diǎn)、條件等信息，以及任何可能影響酶活性的因素，如樣本的處理方式和儲(chǔ)存條件。
點(diǎn)擊進(jìn)入【學(xué)院】查看動(dòng)/植物樣品的采集制備與保存運(yùn)輸。
樣本要求
采集的樣品，均應(yīng)在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行分析檢測(cè)，如不能及時(shí)分析檢測(cè)的則需要進(jìn)行處理和保存，一般應(yīng)遵循的原則是：環(huán)境干燥、溫度較低、避免光照、密封保存。
鮮樣：取樣后立即放入用于包裝樣本的鋁箔或冷凍保存管（提前進(jìn)行編號(hào)）并放入液氮速凍，-80℃超低溫冰箱保存，足量干冰郵寄運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融。
烘干樣：取樣后用柔軟濕布擦凈，不應(yīng)用水沖洗。盡快晾干并將樣品置于105?℃的烘箱中烘 15min以終止樣品中酶的活動(dòng)。經(jīng)過(guò)殺青之后，應(yīng)立即降低烘箱的溫度，維持在70 ～80℃，直到烘至恒重。若測(cè)定樣品中金屬元素的含量，應(yīng)注意金屬器械的污染問(wèn)題，以防干擾。
樣品前處理
組織樣品前處理
動(dòng)物：對(duì)于動(dòng)物組織樣品，首先需要將組織樣品進(jìn)行研磨或切割，以釋放細(xì)胞內(nèi)的酶?？梢允褂秒x心等方法將細(xì)胞壁破碎，釋放酶。
植物：對(duì)于植物組織樣品，需要將植物組織研磨或切割，并使用適當(dāng)?shù)奶崛∫禾崛≈参锛?xì)胞內(nèi)的酶。
血液樣品前處理
動(dòng)物：對(duì)于血液樣品，可以通過(guò)離心或沉淀的方式將血細(xì)胞分離出來(lái)，獲取血清或血漿樣品。血清或血漿樣品中含有豐富的酶，在適當(dāng)條件下可以測(cè)定其活性。
植物：對(duì)于植物血液樣品，可以將植物汁液離心或沉淀，獲取含有酶的上清液進(jìn)行后續(xù)的酶活檢測(cè)。
細(xì)胞樣品前處理
對(duì)于細(xì)胞樣品，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解處理，釋放細(xì)胞內(nèi)的酶。可以使用細(xì)胞裂解液或超聲波等方法進(jìn)行細(xì)胞破碎，并獲取含有酶的提取液。
酶提取
·使用合適的緩沖液提取酶，緩沖液的選擇應(yīng)考慮酶的最適pH和穩(wěn)定性，常見(jiàn)的緩沖液包括磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液等。
·添加蛋白酶抑制劑（如PMSF、抑肽酶等）以防止酶被其他蛋白酶降解。
·根據(jù)酶的性質(zhì)，可能需要在低溫下進(jìn)行提取，以減少酶的失活。
樣品澄清
使用離心（通常是10,000-15,000 rpm，10-30分鐘）或過(guò)濾去除細(xì)胞碎片和其他不溶性物質(zhì)，以得到澄清的酶提取液。
蛋白質(zhì)濃度測(cè)定
測(cè)定酶提取液中的總蛋白質(zhì)濃度，常用的測(cè)定方法包括BCA法、Bradford法等，這對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)化酶活性測(cè)定至關(guān)重要。
酶活性測(cè)定
·根據(jù)目標(biāo)酶的特性，選擇合適的底物和檢測(cè)方法。常見(jiàn)的酶活性測(cè)定方法包括分光光度法、熒光法、放射性同位素法等。
·控制反應(yīng)條件，如溫度、pH、反應(yīng)時(shí)間等，確保酶活性測(cè)定的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
樣品儲(chǔ)存
·如果不能立即進(jìn)行酶活性測(cè)定，酶提取液應(yīng)儲(chǔ)存在適當(dāng)?shù)臈l件下（如-20°C或-80°C），并避免反復(fù)凍融，以保持酶的活性。
注意事項(xiàng)
·整個(gè)前處理過(guò)程中應(yīng)避免酶的非特異性吸附和失活，使用無(wú)菌操作，避免微生物污染。
·根據(jù)酶的特性，可能需要在特定的條件下進(jìn)行處理，如某些酶可能需要在無(wú)氧環(huán)境下處理，以防止氧化。
·樣品前處理的每一步驟都應(yīng)詳細(xì)記錄，包括使用的試劑、條件和結(jié)果，以便于實(shí)驗(yàn)的復(fù)現(xiàn)和結(jié)果的解釋。
漢廣提供“一站式”檢測(cè)服務(wù)，您只需要提供樣本原樣，漢廣會(huì)嚴(yán)格按照國(guó)標(biāo)或行標(biāo)，進(jìn)行樣本前處理、指標(biāo)檢測(cè)，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、報(bào)告編寫(xiě)等工作，減少科研工作者的工作量。
取樣前，請(qǐng)與業(yè)務(wù)經(jīng)理溝通您的檢測(cè)需求，確認(rèn)樣品類型以及寄樣方式，以免影響檢測(cè)數(shù)據(jù)的真實(shí)性，造成時(shí)間及成本的損失！
服務(wù)流程
檢測(cè)儀器
